Рп5 ягница: Погода в Ягнице сегодня, прогноз погоды Ягница на сегодня, Череповецкий район, Вологодская область, Россия

Прогноз погоды в деревне Новая Ягница на 09.07.2021

Погода в д. Новая Ягница на 9 июля 2021, прогноз погоды в деревне Новая Ягница, Череповецкого района, Вологодской области на 09.07.2021

Погода в д. Новая Ягница (Череповецкий район, Вологодская область) на 9 июля 2021

+19,0° … +31,9°

ясно

Утро: +21,6°

День: +31,2°

Вечер: +27,6°

Ночь: +23,8°

Ветер: 4,4 м/с, Запад

Влажность: 41 %

Давление: 766 мм рт. ст.

Почасовой прогноз погоды в д. Новая Ягница на 09.07.2021

	Температура	Осадки	Ветер	Влажность	Облачность	Давление
00:00	+20,1°	слегка облачно	2,7 м/с, Запад	78%	21%	767 мм рт. ст.
01:00	+20,4°	слегка облачно	2,6 м/с, Запад	77%	18%	767 мм рт. ст.
02:00	+20,6°	слегка облачно	2,6 м/с, Запад	77%	15%	767 мм рт. ст.
03:00	+21,1°	ясно	2,5 м/с, Запад	77%	10%	767 мм рт. ст.
04:00	+21,9°	ясно	2,7 м/с, Запад	74%	14%	767 мм рт. ст.
05:00	+22,6°	ясно	2,8 м/с, Запад	72%	18%	767 мм рт. ст.
06:00	+24,1°	слегка облачно	3,0 м/с, Запад	67%	27%	767 мм рт. ст.
07:00	+25,8°	слегка облачно	3,2 м/с, Запад	61%	21%	766 мм рт. ст.
08:00	+27,5°	слегка облачно	3,3 м/с, Запад	55%	15%	766 мм рт. ст.
09:00	+31,0°	ясно	3,6 м/с, Запад	43%	3%	766 мм рт. ст.
10:00	+30,9°	ясно	3,1 м/с, Запад	43%	6%	766 мм рт. ст.
11:00	+30,8°	ясно	2,6 м/с, Запад	44%	10%	766 мм рт. ст.
12:00	+30,5°	слегка облачно	1,6 м/с, Запад	46%	17%	766 мм рт. ст.
13:00	+30,3°	слегка облачно	2,1 м/с, Запад	46%	27%	766 мм рт. ст.
14:00	+30,2°	слегка облачно	2,6 м/с, Запад	46%	38%	766 мм рт. ст.
15:00	+29,8°	пасмурно	3,7 м/с, Запад	47%	60%	765 мм рт. ст.
16:00	+28,6°	пасмурно	3,3 м/с, Северо-Запад	52%	67%	765 мм рт. ст.
17:00	+27,3°	пасмурно	3,0 м/с, Северо-Запад	58%	75%	765 мм рт. ст.
18:00	+24,8°	сильная облачность	2,3 м/с, Север	69%	90%	765 мм рт. ст.
19:00	+24,1°	сильная облачность	2,1 м/с, Запад	72%	75%	765 мм рт. ст.
20:00	+23,3°	сильная облачность	1,9 м/с, Юг	76%	61%	765 мм рт. ст.
21:00	+21,9°	облачно	1,5 м/с, Северо-Восток	84%	32%	765 мм рт. ст.
22:00	+21,8°	облачно	1,4 м/с, Восток	85%	31%	765 мм рт. ст.
23:00	+21,6°	облачно	1,4 м/с, Юг	86%	31%	765 мм рт. ст.

Погода в д. Новая Ягница на 9.07.2021. Для определения погоды на конкретную дату можно пользоваться разными порталами, такими как гудметео, гисметео, гидрометцентр и другими источниками метеостанций и метеонаблюдений. Самый точный почасовой прогноз погоды в деревне Новая Ягница, Череповецкий район, Вологодская область на 09 июля 2021 даст информацию о температуре воздуха и воды, вероятности осадков, атмосферном давлении, ясности неба, влажности, скорости и направлении ветра.

Погода gismeteo в Ягнице на 2 недели, 14 дней

👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 сегодня 03 августа, вторник ночь день Облачно 16 Облачно 23 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 завтра 04 августа, среда ночь день Пасмурно, небольшой дождь 17 Пасмурно, небольшой дождь 24 завтра 04 августа, среда Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 17 774 Ю-З 3 84 Утро Переменная облачность, небольшой дождь 20 779 Ю 2 90 День Пасмурно, небольшой дождь 24 776 Ю-З 2 70 Вечер Переменная облачность, небольшой дождь 22 749 Ю-З 5 73 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 послезавтра 05 августа, четверг ночь день Переменная облачность, небольшой дождь 17 Переменная облачность, небольшой дождь 23 послезавтра 05 августа, четверг Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь 17 773 Ю-З 5 77 Утро Переменная облачность, небольшой дождь 20 779 Ю 3 78 День Переменная облачность, небольшой дождь 23 764 Ю-З 1 73 Вечер Облачно, небольшой дождь 22 755 Ю-З 1 71 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 06 августа, пятница ночь день Облачно, небольшой дождь, гроза 17 Облачно, небольшой дождь, гроза 24 06 августа, пятница Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Облачно, небольшой дождь, гроза 17 766 Ю-З 3 81 Утро 20 761 Ю 5 88 День Облачно, небольшой дождь, гроза 24 743 Ю-З 4 71 Вечер 22 758 Ю-З 4 72 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 07 августа, суббота ночь день Малооблачно 16 Малооблачно 23 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 08 августа, воскресенье ночь день Переменная облачность, небольшой дождь 16 Переменная облачность, небольшой дождь 23 08 августа, воскресенье Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь 16 758 Ю-З 4 89 Утро Ясно, небольшой дождь 19 770 Ю 4 73 День Переменная облачность, небольшой дождь 23 770 Ю-З 5 88 Вечер Облачно, небольшой дождь 21 756 Ю-З 5 81 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 09 августа, понедельник ночь день Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 09 августа, понедельник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 762 Ю-З 4 86 Утро 18 774 Ю 2 74 День Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 755 Ю-З 3 82 Вечер 20 761 Ю-З 4 78 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 10 августа, вторник ночь день Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 10 августа, вторник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 774 Ю-З 1 77 Утро 18 772 Ю 1 81 День Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 740 Ю-З 1 70 Вечер 20 750 Ю-З 5 87 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 11 августа, среда ночь день Пасмурно, небольшой дождь 16 Пасмурно, небольшой дождь 21 11 августа, среда Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 16 763 Ю-З 3 75 Утро Облачно, небольшой дождь 18 743 Ю 2 72 День Пасмурно, небольшой дождь 21 762 Ю-З 5 87 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 20 761 Ю-З 4 72 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 12 августа, четверг ночь день Пасмурно, небольшой дождь 16 Пасмурно, небольшой дождь 21 12 августа, четверг Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 16 770 Ю-З 1 75 Утро Переменная облачность, небольшой дождь 18 763 Ю 2 81 День Пасмурно, небольшой дождь 21 755 Ю-З 2 80 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 20 751 Ю-З 5 84 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 13 августа, пятница ночь день Пасмурно, небольшой дождь 15 Пасмурно, небольшой дождь 20 13 августа, пятница Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 15 774 Ю-З 1 90 Утро Облачно, небольшой дождь 17 755 Ю 5 72 День Пасмурно, небольшой дождь 20 773 Ю-З 4 90 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 19 776 Ю-З 3 84 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 14 августа, суббота ночь день Пасмурно, дождь 14 Пасмурно, дождь 19 14 августа, суббота Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, дождь 14 758 Ю-З 2 90 Утро Переменная облачность, дождь 16 757 Ю 3 89 День Пасмурно, дождь 19 762 Ю-З 1 80 Вечер Облачно, дождь 18 742 Ю-З 1 76 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 15 августа, воскресенье ночь день Пасмурно, небольшой дождь 14 Пасмурно, небольшой дождь 19 15 августа, воскресенье Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 14 775 Ю-З 5 85 Утро Ясно, небольшой дождь 16 778 Ю 4 79 День Пасмурно, небольшой дождь 19 770 Ю-З 5 81 Вечер Переменная облачность, небольшой дождь 18 744 Ю-З 3 88 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 16 августа, понедельник ночь день Пасмурно 14 Пасмурно 20 Прогноз погоды за другие периоды Погода в соседних населенных пунктах

Погода в Ягнице на день, неделю, 14 дней и месяц

👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 сегодня 03 августа, вторник ночь день Облачно 16 Облачно 23 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 завтра 04 августа, среда ночь день Пасмурно, небольшой дождь 17 Пасмурно, небольшой дождь 24 завтра 04 августа, среда Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 17 743 Ю-З 3 70 Утро Переменная облачность, небольшой дождь 20 752 Ю 2 73 День Пасмурно, небольшой дождь 24 779 Ю-З 3 88 Вечер Облачно, небольшой дождь 22 764 Ю-З 2 84 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 послезавтра 05 августа, четверг ночь день Переменная облачность, небольшой дождь 17 Переменная облачность, небольшой дождь 23 послезавтра 05 августа, четверг Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь 17 760 Ю-З 3 72 Утро Облачно, небольшой дождь 20 771 Ю 3 76 День Переменная облачность, небольшой дождь 23 741 Ю-З 3 75 Вечер Облачно, небольшой дождь 22 779 Ю-З 1 79 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 06 августа, пятница ночь день Облачно, небольшой дождь, гроза 17 Облачно, небольшой дождь, гроза 24 06 августа, пятница Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Облачно, небольшой дождь, гроза 17 740 Ю-З 2 80 Утро 20 751 Ю 2 85 День Облачно, небольшой дождь, гроза 24 776 Ю-З 1 81 Вечер 22 756 Ю-З 4 79 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 07 августа, суббота ночь день Малооблачно 16 Малооблачно 23 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 08 августа, воскресенье ночь день Переменная облачность, небольшой дождь 16 Переменная облачность, небольшой дождь 23 08 августа, воскресенье Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь 16 752 Ю-З 3 89 Утро Переменная облачность, небольшой дождь 19 746 Ю 4 72 День Переменная облачность, небольшой дождь 23 773 Ю-З 3 81 Вечер Ясно, небольшой дождь 21 748 Ю-З 5 73 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 09 августа, понедельник ночь день Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 09 августа, понедельник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 758 Ю-З 5 79 Утро 18 778 Ю 3 84 День Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 764 Ю-З 4 80 Вечер 20 758 Ю-З 3 72 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 10 августа, вторник ночь день Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 10 августа, вторник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь, гроза 16 753 Ю-З 1 79 Утро 18 758 Ю 5 85 День Пасмурно, небольшой дождь, гроза 21 745 Ю-З 5 82 Вечер 20 743 Ю-З 3 86 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 11 августа, среда ночь день Пасмурно, небольшой дождь 16 Пасмурно, небольшой дождь 21 11 августа, среда Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 16 767 Ю-З 1 90 Утро Пасмурно, небольшой дождь 18 752 Ю 3 88 День Пасмурно, небольшой дождь 21 751 Ю-З 3 82 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 20 759 Ю-З 5 70 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 12 августа, четверг ночь день Пасмурно, небольшой дождь 16 Пасмурно, небольшой дождь 21 12 августа, четверг Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 16 742 Ю-З 1 79 Утро Пасмурно, небольшой дождь 18 777 Ю 5 85 День Пасмурно, небольшой дождь 21 777 Ю-З 4 90 Вечер Переменная облачность, небольшой дождь 20 742 Ю-З 5 73 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 13 августа, пятница ночь день Пасмурно, небольшой дождь 15 Пасмурно, небольшой дождь 20 13 августа, пятница Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 15 760 Ю-З 3 85 Утро Ясно, небольшой дождь 17 748 Ю 2 82 День Пасмурно, небольшой дождь 20 760 Ю-З 3 90 Вечер Облачно, небольшой дождь 19 774 Ю-З 3 79 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 14 августа, суббота ночь день Пасмурно, дождь 14 Пасмурно, дождь 19 14 августа, суббота Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, дождь 14 751 Ю-З 4 70 Утро Переменная облачность, дождь 16 778 Ю 5 78 День Пасмурно, дождь 19 763 Ю-З 2 73 Вечер Пасмурно, дождь 18 766 Ю-З 3 83 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 15 августа, воскресенье ночь день Пасмурно, небольшой дождь 14 Пасмурно, небольшой дождь 19 15 августа, воскресенье Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, небольшой дождь 14 756 Ю-З 3 82 Утро Облачно, небольшой дождь 16 741 Ю 2 90 День Пасмурно, небольшой дождь 19 774 Ю-З 1 72 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 18 741 Ю-З 4 75 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 16 августа, понедельник ночь день Пасмурно 14 Пасмурно 20 Прогноз погоды за другие периоды Погода в соседних населенных пунктах

Погода в Спас-Ломе на день, неделю, 14 дней и месяц

👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 сегодня 03 августа, вторник ночь день Переменная облачность 16 Переменная облачность 22 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 завтра 04 августа, среда ночь день Малооблачно, небольшой дождь, гроза 17 Малооблачно, небольшой дождь, гроза 24 завтра 04 августа, среда Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Малооблачно, небольшой дождь, гроза 17 747 Ю-З 2 76 Утро 20 765 Ю 1 74 День Малооблачно, небольшой дождь, гроза 24 759 Ю-З 1 89 Вечер 22 756 Ю-З 2 73 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 послезавтра 05 августа, четверг ночь день Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 17 Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 26 послезавтра 05 августа, четверг Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 17 756 Ю-З 3 78 Утро 21 745 Ю 4 78 День Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 26 749 Ю-З 2 78 Вечер 23 761 Ю-З 2 77 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 06 августа, пятница ночь день Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 18 Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 22 06 августа, пятница Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 18 741 Ю-З 2 85 Утро 20 774 Ю 2 76 День Переменная облачность, небольшой дождь, гроза 22 772 Ю-З 5 86 Вечер 22 765 Ю-З 3 90 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 07 августа, суббота ночь день Переменная облачность, небольшой дождь 15 Переменная облачность, небольшой дождь 21 07 августа, суббота Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь 15 760 Ю-З 3 84 Утро Ясно, небольшой дождь 18 772 Ю 1 72 День Переменная облачность, небольшой дождь 21 770 Ю-З 4 89 Вечер Переменная облачность, небольшой дождь 20 760 Ю-З 2 76 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 08 августа, воскресенье ночь день Переменная облачность 13 Переменная облачность 19 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 09 августа, понедельник ночь день Переменная облачность 12 Переменная облачность 20 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 10 августа, вторник ночь день Ясно 11 Ясно 20 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 11 августа, среда ночь день Ясно 11 Ясно 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 12 августа, четверг ночь день Переменная облачность 12 Переменная облачность 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 13 августа, пятница ночь день Пасмурно 16 Пасмурно 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 14 августа, суббота ночь день Пасмурно, дождь, гроза 16 Пасмурно, дождь, гроза 21 14 августа, суббота Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, дождь, гроза 16 745 Ю-З 3 87 Утро 18 779 Ю 2 75 День Пасмурно, дождь, гроза 21 766 Ю-З 1 74 Вечер 20 754 Ю-З 5 75 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 15 августа, воскресенье ночь день Облачно, дождь, гроза 16 Облачно, дождь, гроза 20 15 августа, воскресенье Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Облачно, дождь, гроза 16 745 Ю-З 3 83 Утро 18 770 Ю 2 71 День Облачно, дождь, гроза 20 757 Ю-З 5 70 Вечер 20 744 Ю-З 1 72 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 16 августа, понедельник ночь день Малооблачно, небольшой дождь 15 Малооблачно, небольшой дождь 20 16 августа, понедельник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Малооблачно, небольшой дождь 15 771 Ю-З 3 89 Утро Облачно, небольшой дождь 17 768 Ю 2 85 День Малооблачно, небольшой дождь 20 750 Ю-З 3 90 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 19 778 Ю-З 2 70 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 17 августа, вторник ночь день Переменная облачность 15 Переменная облачность 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 18 августа, среда ночь день Ясно 15 Ясно 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 19 августа, четверг ночь день Малооблачно 15 Малооблачно 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 20 августа, пятница ночь день Малооблачно 15 Малооблачно 22 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 21 августа, суббота ночь день Ясно 15 Ясно 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 22 августа, воскресенье ночь день Малооблачно, гроза 15 Малооблачно, гроза 21 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 23 августа, понедельник ночь день Пасмурно, дождь, гроза 15 Пасмурно, дождь, гроза 20 23 августа, понедельник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Пасмурно, дождь, гроза 15 776 Ю-З 5 71 Утро 17 768 Ю 1 89 День Пасмурно, дождь, гроза 20 756 Ю-З 4 90 Вечер 19 779 Ю-З 3 90 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 24 августа, вторник ночь день Переменная облачность, небольшой дождь 14 Переменная облачность, небольшой дождь 20 24 августа, вторник Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Переменная облачность, небольшой дождь 14 762 Ю-З 5 74 Утро Пасмурно, небольшой дождь 17 762 Ю 3 80 День Переменная облачность, небольшой дождь 20 758 Ю-З 4 85 Вечер Пасмурно, небольшой дождь 19 780 Ю-З 3 77 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 25 августа, среда ночь день Облачно 15 Облачно 20 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 26 августа, четверг ночь день Облачно, небольшой дождь 14 Облачно, небольшой дождь 20 26 августа, четверг Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Облачно, небольшой дождь 14 746 Ю-З 3 82 Утро Пасмурно, небольшой дождь 17 742 Ю 2 70 День Облачно, небольшой дождь 20 743 Ю-З 5 85 Вечер Облачно, небольшой дождь 19 775 Ю-З 4 84 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 27 августа, пятница ночь день Малооблачно, небольшой дождь 14 Малооблачно, небольшой дождь 19 27 августа, пятница Характеристика погоды, атмосферные явления Tемпература воздуха, °C Атм. давл., мм рт. ст. Ветер, м/с Влажность воздуха, % Ночь Малооблачно, небольшой дождь 14 752 Ю-З 4 71 Утро Облачно, небольшой дождь 16 749 Ю 2 79 День Малооблачно, небольшой дождь 19 751 Ю-З 1 72 Вечер Переменная облачность, небольшой дождь 18 772 Ю-З 1 76 👇 Нажмите на блок, чтобы получить подробную погоду на сутки 👇 28 августа, суббота ночь день Ясно 13 Ясно 18 Прогноз погоды за другие периоды Погода в соседних населенных пунктах

РП5 03в

Если бы вы знали удовольствие

То, что Младенец имеет от сна

Не опасаясь, что Его разбудят

Ты будешь колыбелью

Иисусу, Кроткому Агнцу,

Улыбается во сне.

[22] Пеленальное белье

Посмотрите, как милое дитя

Своим любимым мизинцем

Показывает сухую соломинку

А! понять Его любовь

И украсить бедную яслях

В этот день пеленки.

Всегда прощать своих сестер

Вы выиграете благосклонность

От Иисуса, Царя ангелов.

Пламенная благотворительность,

Добрая простота

То, что Он желает, как Свою пелену.

[23] Пожар

Моя сестра, Маленький Иисус,

Сладкий очаг избранных,

Дрожит от холода в конюшне

Тем не менее, в прекрасном голубом небе,

Ангелы, пламя огня,

Служил милому слову.

Но на земле это ты

Кто сердце вашего супруга

Он просит вас поджечь.

Это ты, дорогая сестра,

Кто должен согреть Спасителя

И сожги все души.

[24] Торт

Вы знаете, что все дети

Предпочитаю великолепный торт

Во славу империи

Подношение Царю Небесному

вкусный торт

И вы увидите Его улыбку…

Знаете ли вы, что такое

Короля королей?

Любимый торт?

Это досягаемое «послушание ….

Вы доставляете удовольствие своему супругу

Когда вы подчиняетесь

Как Он делал в детстве.

[25] Мед

У первых утренних лучей,

Пчелку можно увидеть

Формирует богатый урожай,

Летая от цветка к цветку,

С радостью посещаю

Венчики, которые она пробуждает.

Так собери любовь

И вернись даже день

Рядом со святыми яслями

В жертву Божественному Спасителю

Мед твоего рвения

Золотая пчелка!, ..

[26] Агнец

Очаровывать нежного барашка

Больше не паси стадо,

И оставив все

Думайте только о том, чтобы доставить Ему удовольствие,

Всегда хорошо служат Ему

Пока он отдыхает.

О моя сестра, с сегодняшнего дня

Предайся Ему

И вы будете спать вместе.

Мария подходит к колыбели

Увидит рядом с ней Агнца

Агнец, похожий на Него.

© Вашингтон, провинция Босых Кармелитов, Инк.

RP 5

Из лилий, символ невинности,

Мне также нравятся насыщенные цвета

Роз покаяния.

Когда твои слезы

Очищение сердец

Велика радость, которую ты причиняешь Мне

Потому что я смогу

Сколько я хочу

Для сбора роз горстями ».

[7] Долина

Как по блеску солнца

Вся природа украшена,

Как он позолота своим розовым огнем

Долина, глубокая и цветущая,

Так Иисус, Божественное Солнце,

Ничего не подходит, чего бы Он не позолотил.

Он великолепен утром

Намного больше, чем блестящий рассвет.

При пробуждении Божественное Солнце

Расточает вашу изгнанную душу

С Его дарами,

Его самые теплые лучи света.

Будь его приятной долиной.

[8] Комбайны

Там, под другими горизонтами,

Несмотря на мороз и снег,

Урожай уже становится золотистым

Который защищает Божественное Дитя.

Но увы! Чтобы собрать их в

Нужны горящие души

Комбайны готовы страдать,

Зажигание меча и пламени.

Рождество, Рождество,

Я прихожу в Кармель

Зная, что мои желания твои.

Для нежного Спасителя

Рожай, сестра,

Многим душам апостолов.

[9] Гроздь винограда

Хочу вкусных фруктов,

Гроздь винограда полностью золотая

Чтобы освежить Царя Небесного,

Обожаемый ротик….

Моя сестра, как сладка твоя судьба!

Вы — выбранный Виноград.

Иисус будет давить на вас очень сильно

В Его маленькой любимой руке.

Нежный милый

Слишком мало

Съесть сам виноград

Сок подслащенный

Им сделал все золотое

Это просто то, что Он любит!

[10] Маленький хозяин

Иисус, прекрасное божественное дитя,

Чтобы сообщить вам о Его жизни

Каждое утро преображается

В маленький белый хозяин.

Еще больше любви

Он хочет превратить вас в Себя

Ваше сердце — Его дорогое сокровище

Его счастье и Его высшая радость.

Рождество, Рождество,

Я спустился с небес

Сказать своей радостной душе:

Нежный ягненок

Опускается к вам

Будь Его Белым и чистым Хозяином.

На мелодию песни «Au Rossignol» поются следующие стихи: «Au Rossignol —

».

Quand ta voix, céleste prélude »и т. Д.

[11] Улыбка

Мир не узнает обереги

Иисуса, вашего любимого супруга,

И я вижу маленькие слезы

Искорки в Его сладких глазах.

Комфорт, о моя любимая сестра,

Этот ребенок, который протягивает к вам руки,

Чтобы очаровать Его, я умоляю вас,

Всегда улыбайся здесь, внизу.

Pro 5’8-1 / 4 «X1 / 2X.025 3T TRI-MASTER BANDSAW BLD QTY 2 TR11023CL5688

Условие:

Новый: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный товар в оригинальной упаковке (если упаковка применимый). Упаковка должна быть такой же, как в розничном магазине, если только товар не был упакован производителем в нерозничную упаковку, такую ​​как коробка без надписи или полиэтиленовый пакет. См. Список продавца для получения полной информации. … Прочитайте больше о состоянии

Batman Automobilia Diecast Car Eaglemoss — Анимационный сериал о Бэтмене Mark 11 & nbsp Fendt ideal 7, привязанный к кукурузе, ros95104, 1/32, шкала ros & nbsp Great Neck — 7-в-1 Пила для глубоких отверстий — от 1 1/2 до 2 Глубина разреза 1/2 «- 1 3/4» — HC7D 76812001306 & nbsp 1999 Экскаватор-экскаватор Tonka Бульдозер Траншеекопатель Трактор-погрузчик с гусеницами M-7541 & nbsp Tomica Dandy Izu No Odoriko Стул Капот Автобусная вставка Вставка для автобуса WALTER VALENITE WNMning WP580408 , Вставка 432, класс WPP20S PK & nbsp GWS TOOL GROUP 317854 317854 Концевая фреза & nbsp 1:18 KengFai 1:18 G-PATTON SUV Внедорожная литая модель автомобиля для мальчиков Подарки черный: белый & nbsp (W_2791) 1/7 Неокрашенная смола Kanojo chuu Sensei Рисунок Kit & nbsp OREI 1×8 HDMI Extender Splitter Несколько по одному кабелю CAT6 / 7 1080P с IR & nbsp Autoart Масштаб 1/18 Diecast — 78642 Subaru New Age Impreza WRX STi Blue & nbsp 1982 ford falcon ghia-press model 1/43 & nbsp FORD, F350, Изготовленный на заказ Ertl Ford F350 дизельный тягач Ertl DCP Farm Toy 1/64 & nbsp 3/8 ”диаметр -16N HSCH -3 401172 Черновая концевая фреза 45 ° & nbsp Honda Nsx Set Of Tomica Limited Vintage Neo & nbsp Cipsa-Rare Plastic Open Wheel Race Car-Missing Wheels-Mexico & nbsp MG Patlabor Shinohara ARL-99B Hell Diver Airborne Troops Model Kit Bandai FREESP & nbsp Sun Star DieCast 1/18 NYC Checker cab Taxi TAXI & nbsp DINKY SUPERTOYS № 972 COLES 20-ТОННЫЙ КРАН, УСТАНОВЛЕННЫЙ НА АВТОМОБИЛЕ, НОВЫЕ ШНУРЫ И КРЮЧОК & nbsp Valken Paintball Airsoft MI-3 Полевые очки / маска с двойным стеклом с линзой синего цвета

Pro 5’8-1 / 4 «X1 / 2X.025 3T TRI-MASTER BANDSAW BLD QTY 2 TR11023CL5688

Pro 5’8-1 / 4 «X1 / 2X.025 3T TRI-MASTER BANDSAW BLD QTY 2 TR11023CL5688

Business & Industrial

Расписание конференции Фредерика Айвор-Кэмпбелла по бейсболу XIX века — Общество американских исследований бейсбола

11-я ежегодная SABR Конференция по бейсболу 19-го века имени Фредерика Айвора-Кэмпбелла состоится 22-24 апреля 2021 года.

Вот полное расписание конференции 2021 года:

Четверг, 22 апреля

(Время указано в восточном часовом поясе)

• 7:45 — 8:00 п.м .: Логин
• 8:00 — 20:10: Приветственное слово, Питер Манкузо и Боб Бейли
• 8:10 — 20:40: RP1 — Том Гилберт, «Бейсболист в Филадельфии, полковник Том Фицджеральд»
• 20:40 — 21:10: RP2 — Деннис Тиссен, «Воскресенье как день покоя, бунтов и восстаний»
• 9:10 — 21:20: Перерыв
• 9:20 — 21:50: RP3 — Крейг Браун, «Элегантный и странный: Фотографии команд XIX века»
• 9:50 — 10:00 п.м .: Закрытие Примечание

Пятница, 23 апреля

• 11:45 — 12:00: Логин
• 12:00 — 12:10: Приветственное слово, Питер Манкузо и Боб Бейли
• 12:10 — 12:40: RP4 — Эдвард Скахилл, «Колледж Хью Дженнингса, Джона МакГроу и Аллегани (выпуск 1894 года)»
• 12:40 — 13:20: Основной доклад, Джон Торн, «Как мы сюда попали»
• 1:20 — 1:40 с.м .: Перерыв
• 13:40 — 14:10: RP5 — Марти Пейн, «Что в имени (отдельные лица и команды)»
• 2:10 — 14:40: RP6 — Билл Хамбер, «Возвращение к корням бейсбола: уроки хоккея и современного футбола»
• 14:40 — 15:10: Перерыв на обед
• 15:10 — 16:10: Панельная дискуссия: «Как ранняя смерть Уильяма Халберта повлияла на развитие MLB до 1900 года?» Модератор: Билл Рычек; Эксперты: Джек Бейлз, Билл Лэмб и Ричард Хершбергер
• 4:10 — 4:20 стр.м .: Перерыв
• 4:20 — 16:50: RP7 — Мэтью Лейб, «Извлечение правды из трагедии в жизни Джима Девлина,« Террор Запада »»
• 4:50 — 17:20: RP8 — Джон Попович, «Г.Л. Верт: Рост реконструкции Базовый бал в Монтгомери, Алабама, 1865-1875 ”
• 17:20 — 17:30: Заключительное слово

суббота, 24 апреля

• 11:45 — 12:00: Логин
• 12:00 — 12:10 стр.м .: Приветственное слово, Питер Манкузо и Боб Бейли
• 12:10 — 12:40: RP9 — Джек Бейлз, «Он будет делать то, что лучше всего, без сомнений: Уильям Халберт закрыл Чикагскую ассоциацию бейсбола»
• 12:40 — 13:25: Специальная презентация: Джим Гейтс, почетный библиотекарь, Национальный зал славы и музей бейсбола, «Сборник нот Пенни Маршалл: новые ресурсы XIX века»
• 13:25 — 13:35: Перерыв
• 1:35 — 2:05 с.м .: RP10 — Лорен Туйскула, «Фрэнк Бэнкрофт и наследие бейсбольного мяча XIX века в долине Блэкстоун»
• 14:05 — 14:35: RP11 — Ларри Филлипс, «Начало бейсбола в Цинциннати»
• 14:35 — 15:00: Перерыв на обед
• 15:00 — 15:45: В центре внимания участников Интервью: Боб Бейли Интервью с Томом Гилбертом
• 15:45 — 16:15: RP12 — Крис Джонс, «Стенд« Росомахи против дикой кошки: битва за трибуны верхних сараев »»
• 4:15 — 4:25 с.м .: Перерыв
• 4:25 — 16:55: RP13 — Джастин Маккинни, «Сезон на грани: Финансы профсоюзной ассоциации»
• 4:55 — 17:00: Заключительное слово

Для получения более подробной информации о конференции Айвор-Кэмпбелл посетите SABR.org/ivor-campbell19c

C-концевая субрегиональная трансактивация VP16 является уникальной, необходимой для индуцированной форсколином реактивации вируса простого герпеса типа 1 из покоящихся инфицированных клеток PC12, но не для репликации в нейронально дифференцированных клетках PC12.

J Нейровирол.Авторская рукопись; доступно в PMC 2014 1 февраля.

Опубликован в окончательной редакции как:

PMCID: PMC3568243

NIHMSID: NIHMS425218

Роберт Дж. Данахер

¹ Департамент стоматологической медицины, Отдел стоматологической медицины Центр исследований здоровья полости рта, стоматологический колледж, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки

² Кафедра микробиологии, иммунологии и молекулярной генетики, Медицинский колледж, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки

Росс К.Повар

¹ Департамент стоматологической практики, Отделение стоматологической медицины, Центр исследований в области гигиены полости рта, Колледж стоматологии, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки

Chunmei Wang

¹ Департамент стоматологической практики, Отдел стоматологии, Центр исследований здоровья полости рта, Стоматологический колледж, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки,

Стивен Дж. Тризенберг

³ Исследовательский институт Ван Андел, Гранд-Рапидс, Мичиган

Роберт Дж.Jacob

¹ Отделение стоматологической практики, Отделение стоматологической медицины, Центр исследований здоровья полости рта, Колледж стоматологии, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки

² Отделение микробиологии, иммунологии и молекулярной генетики, Колледж Медицина, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки,

Крейг С. Миллер,

¹ Отделение стоматологической практики, Отделение оральной медицины, Центр исследований здоровья полости рта, Стоматологический колледж, Университет Кентукки, Лексингтон, Кентукки

² Кафедра микробиологии, иммунологии и молекулярной генетики, Медицинский колледж, Университет Кентукки, Лексингтон, штат Кентукки,

¹ Кафедра практики гигиены полости рта, Отделение стоматологической медицины, Центр исследований здоровья полости рта, Колледж стоматологии, Университет of Kentucky, Lexington, KY

² Кафедра микробиологии, иммунологии и молекулярной генетики, Медицинский колледж, U Университет Кентукки, Лексингтон, Кентукки

³ Исследовательский институт Ван Андел, Гранд-Рапидс, Мичиган

^* Автор, ответственный за переписку: Dr.Крейг С. Миллер, Отделение оральной медицины, MN 324, Стоматологический колледж Университета Кентукки, 800 Rose Street, Lexington, KY 40536-0297 Тел .: 859-323-5598 (офис), Факс: 859-323-9136, ude. yku @ rellimc Окончательная отредактированная версия этой статьи издателем доступна на сайте J Neurovirol. См. другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.

Abstract

Тегументный белок VP16 HSV-1 содержит домен трансактивации (TAD), который необходим для индукции генов немедленного раннего развития (IE) во время литической инфекции и индуцированной реактивации с латентного периода.Здесь мы сообщаем о дифференциальных вкладах двух субрегионов TAD в нейрональные и ненейрональные клетки во время активации экспрессии гена IE, репликации вируса и реактивации из неподвижно инфицированных (QIF) -PC12 клеток. Наши исследования показывают, что активация гена IE, индуцированная VP16 и химическим (гексаметиленбисацетамидом), ослабляется в нейрональных клетках. Независимо от нейронального или ненейронального клеточного фона, активация гена IE продемонстрировала большую потребность в N-концевой субрегионе VP16 TAD (VP16N), чем в C-концевой субрегионе (VP16C).В отличие от этих открытий, рекомбинантный вирус (RP4), содержащий делецию VP16N, был способен к умеренной реактивации, индуцированной форсколином, тогда как рекомбинантный вирус (RP3), содержащий делецию VP16C, был неспособен к индуцированной стрессом реактивации из клеток QIF-PC12. Эти уникальные зависящие от процесса функции субрегионов VP16 TAD могут быть важны на определенных стадиях жизненного цикла вируса (литика, вход и поддержание состояния покоя и реактивация), когда ожидается, что вирусная ДНК будет дифференцированно модифицироваться.

Ключевые слова: вирус простого герпеса, латентность и покой вируса, репликация, реактивация, клетки VP16, QIF-PC12

Вирус простого герпеса типа 1 (HSV-1) кодирует около 90 уникальных транскрипционных единиц, которые кодируют не менее 84 белков с одна или несколько функций (Ройзман и Книп 2001). Некоторые гены и уникальные функциональные домены многофункциональных белков необходимы для репликации вируса в культуре клеток. Потребность в определенных генах и / или определенных функциях белка часто зависит от вида и типа клетки инфицированной клетки, а также от исследуемого биологического процесса.Определение уникальных вирусных факторов, необходимых для отдельных стадий латентного периода ВПГ в периферических нейронах (т. Е. Становления, поддержания и реактивации), осложняется влиянием этих факторов на несколько стадий жизненного цикла вируса. Особый интерес представляет важный белок-тегумент VP16, который, благодаря своим взаимодействиям с белками клетки-хозяина HCF и Oct-1, является основным трансактиватором экспрессии вирусного немедленного раннего (IE) гена во время литической инфекции (Weinheimer et al.1992; Tal-Singer et al. 1999) и необходим для ранних стадий реактивации с латентного периода (Thompson et al. 2009; Sawtell et al. 2011). В дополнение к уникальным доменам, необходимым для его взаимодействия с HCF и Oct-1, VP16 также содержит мощный домен активации транскрипции (TAD), расположенный в его последних 80 C-концевых аминокислотах (Triezenberg et al. 1988; Cousens et al. 1989) . VP16 также необходим на более поздних стадиях репликативного цикла для сборки вириона (Poon and Roizman, 1995), а также взаимодействует с белком отключения вириона-хозяина (vhs) и ингибирует его (Smibert et al.1994; Лам и др. 1996; Schmelter et al. 1996) предотвращение vhs-опосредованного разрушения вирусной мРНК и остановки трансляции.

Вклад VP16-опосредованной активации генов IE во время реактивации из-за вирусной латентности не совсем понятен. С одной стороны, рекомбинантный вирус в 1814 имеет значительно сниженную способность активировать экспрессию гена IE из-за вставки 4 аминокислот в область VP16, которая взаимодействует с HCF-1 и Oct1 с образованием комплекса, индуцированного VP16 (VIC , см.) (Ace et al.1989; Wysocka and Herr 2003). Тем не менее, из 1814 эффективно реактивирует латентный период HSV-1 как на животных (Steiner et al. 1990; Valyinagy et al. 1991), так и на клеточных культурах (Miller et al. 2006). Напротив, рекомбинантный вирус RP5, который полностью лишен способности активировать экспрессию гена IE из-за делеции большей части VP16 TAD, неспособен к реактивации, индуцированной эксплантатом (Tal-Singer et al. 1999). Однако неспособность RP5 реактивироваться in vivo может быть интерпретирована как следствие его неспособности установить эффективное состояние в периферической нервной системе иммунокомпетентных мышей.Более свежие данные с V422, мутантом, похожим на RP5, показали, что он также неспособен к реактивации в модели неподвижно инфицированного (QIF) -PC12, когда эквивалентные количества вирусных копий мутантного штамма и штамма дикого типа легко устанавливаются во время латентного периода (Miller et al. др. 2006). Вместе эти данные поддерживают разнообразные и необъяснимые требования VP16 во время реактивации из-за задержки.

Схематическое изображение генома ( a ) HSV-1 и полипептида ( b ) VP16 с указанием области, участвующей в сборке VP16-индуцированного комплекса (VIC) с Oct-1 и HCF-1 и транс- домен активации (TAD).Верхняя диаграмма адаптирована из (Knez et al. 2003). Нижние панели адаптированы из (Tal-Singer et al. 1999). RP3: усечен по кодону 456. RP4: не хватает аминокислот 413–452. RP5: усечено по кодону 412.

Потенциально ключевой функцией VP16 во время реактивации с латентного периода является трансактивация экспрессии гена IE. VP16 TAD состоит из двух субрегионов (VP16N и VP16C, см.), Каждая из которых имеет переменный потенциал для активации экспрессии гена IE (Triezenberg et al. 1988; Regier et al. 1993; Walker et al.1993). В предыдущих отчетах было обнаружено, что подобласть VP16N более важна, чем подобласть VP16C, для активации временно трансфицированных промоторов IE (Tal-Singer et al. 1999) и для эффективной активации экспрессии гена IE во время литической инфекции в HeLa. клетки (Ян и др., 2002). Однако относительная важность этих двух субрегионов в реактивации HSV-1 из состояния покоя неизвестна. Здесь мы использовали хорошо охарактеризованную модель латентности HSV-1 QIF-PC12 (Danaher et al.1999a, 1999b), которая похожа, но отличается от модели PC12, описанной Block et al. (Block et al. 1994), за преимущество установления сходных уровней вирусной латентности, из которых можно было бы отделить роль этой области в реактивации in vitro. Мы предположили, что VP16N необходим для эффективной реактивации из-за его большей роли в активации экспрессии гена IE, как сообщалось ранее (Tal-Singer et al. 1999; Yang et al. 2002).

Материалы и методы

Клетки и вирусы

Клетки феохромоцитомы крысы (PC12) и почки африканской зеленой мартышки (Vero) выращивали, как описано ранее (Danaher et al.1999b). Клетки остеосаркомы человека (U2OS) и фибробластов легких крысы (RFL-6) выращивали в среде McCoy 5A с добавлением 10% FBS и среде F-12K с добавлением 20% FBS соответственно. Все клетки были получены из Американской коллекции типовых культур (Роквилл, Мэриленд) и поддерживались при 37 ° C в 5% CO ₂ . Рекомбинантные штаммы HSV-1, несущие делеции всех или частей VP16 TAD, были описаны ранее (Tal-Singer et al. 1999). К ним относятся штаммы RP1 (интактный TAD), RP3 (без аминокислот 456–490, VP16C), RP4 (без аминокислот 413–452, VP16N) и RP5 (без аминокислот 413–490) ().Размножение и титрование запасов вируса проводили в клетках Vero и U2OS, соответственно, в средах с добавлением 3 мкМ N, N’-гексаметиленбисацетамида (HMBA). Во всех экспериментах клетки инокулировали с указанными MOI, как определено на клетках U2OS в присутствии HMBA.

Нейрональная дифференцировка

Клетки PC12 были диссоциированы пропусканием через иглу 22 размера и помещены в RPMI 1640, содержащий 0,1% фракцию V бычьего сывороточного альбумина (BSA), в чашки для культур тканей, покрытые коллагеном из хвоста крысы типа 1 (Becton Dickinson, Franklin Озера, Нью-Джерси) на 2.2 × 10 ⁵ клеток / лунку для 12-луночных планшетов или 5,5 × 10 ⁵ клеток / лунку для 6-луночных планшетов. Клетки дифференцировали по нейронам (ND) и поддерживали в среде RPMI 1640 с добавлением 0,1% BSA и 50 нг / мл 2,5S мышиного фактора роста нервов (NGF) (Becton Dickinson) (поддерживающая среда), начиная с дня посева. По существу, 100% клеток показали морфологические индикаторы дифференцировки, на что указывает микроскопическая визуализация дендритных процессов.

Количественная оценка относительной активности гена

Клетки PC12 высевали в 6-луночные чашки, покрытые коллагеном, и нейронно дифференцировали в течение одной недели до инфицирования.Клетки Vero, U2OS и RFL-6 высевали в 6-луночные чашки для культур тканей из расчета 5,5 × 10 ⁵ клеток / лунку за день до инфицирования. Клетки инокулировали HSV-1 при множественности инфицирования (MOI), равной 1. После 2-часовой инкубации при комнатной температуре клетки дважды промывали соответствующей культуральной средой и инкубировали при 37 ° C в течение 4 часов в присутствии и в отсутствие HMBA. (3 мкМ). Общую РНК очищали от культур, инфицированных HSV-1, с помощью набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA) и определяли количественно спектрофотометрически.РНК (2,5 мкг) обрабатывали ДНКазой без использования ДНК (Ambion, Austin, TX), как рекомендовано производителем. РНК, обработанную ДНКазой, подвергали обратной транскрипции с использованием случайных праймеров и SuperScript II (Invitrogen). Количество кДНК, синтезированной для выбранных транскриптов хозяина и вируса, определяли с помощью ПЦР в реальном времени, как описано ранее (Danaher et al. 2005). Оцениваемые гены включали α0 (кодирует ICP0), α4 (кодирует ICP4) и α27 (кодирует ICP27). Праймеры и зонды такие же, как описано (Cohrs et al., 2000) для α27 и (Danaher et al.2005) для α4 и α0. Все ПЦР-анализы отрицательного контроля (-Rtase) и экспериментальных (+ RTase) образцов проводили, как сообщалось ранее (Danaher et al. 2005), индивидуально и в трех экземплярах, соответственно, из повторяющихся образцов, если не указано иное. Каждый анализ ПЦР в реальном времени включал пять стандартов, исследованных в трех повторностях.

Установление покоящейся инфекции и реактивация HSV-1

Спокойные инфекции HSV-1 были установлены в клетках ND-PC12 в 12-луночных планшетах при MOI 1, как описано ранее (Danaher et al.1999b; Miller et al. 2006 г.). Вкратце, клетки ND-PC12 культивировали в поддерживающей среде в течение 4 дней после посева. В дни с 4 по 6 клетки культивировали в поддерживающей среде с добавлением 10% лошадиной сыворотки и 5% FBS вместо BSA. На 6 день клетки культивировали в поддерживающей среде с добавлением 100 М ациклогуанозина (ACV) (Sigma, Сент-Луис, Миссури), а затем инокулировали вирусом (12, 12-луночные планшеты / штамм) на следующий день. Инфицированные клетки культивировали в поддерживающей среде с добавлением ACV в течение 10 дней.После отмены ACV состояние покоя сохранялось в течение 7 дней до экспериментальной стрессовой обработки (4,12-луночные планшеты / штамм / группа лечения). Культуры, в которых не было обнаруживаемого инфекционного вируса, как определено в супернатантах культур, подвергали стрессовой обработке для активации вируса на 17-й день после инфицирования (pi), подвергая клетки тепловому стрессу (HS) (43 ° C в течение 3 часов) или в поддерживающей среде. с добавлением 50 мкМ форсколина (Sigma), как описано ранее (Danaher et al. 1999a, 1999b). Супернатанты клеточной культуры QIF-PC12 контролировали на продукцию вируса с помощью анализа образования бляшек, выполняемого на монослоях клеток U2OS в среде, дополненной HMBA и объединенным человеческим IgG.Культуры считали положительной реактивацией в первый день, когда на индикаторных клетках были обнаружены одна или несколько бляшек.

Анализ роста вирусов

Клетки PC12 высевали на 12-луночные чашки, покрытые коллагеном, и дифференцировали нейроны, как описано выше, для количественной оценки относительной активности гена. Через одну неделю после посева клетки инокулировали HSV-1 при MOI 1 и 10. Через 2 часа инкубации при 37 ° C клетки промывали один раз цитратным буфером, pH 3, дважды промывали поддерживающей средой, а затем инкубировали в поддерживающей среде. при 37 ° С.Культуры замораживали в разное время после инокуляции, и титры вирусов определяли в двух экземплярах с помощью анализа бляшек с клетками U2OS в среде, дополненной HMBA и объединенным человеческим IgG.

Результаты

Активация гена IE нарушена в нейрональных клетках

В настоящее время вклад нейронального фенотипа в способность VP16 активировать экспрессию гена IE до конца не изучен. Первоначально мы обратились к этому, сравнив экспрессию гена IE в нейрональных и ненейрональных клетках, инфицированных рекомбинантным вирусом, лишенным VP16 TAD (RP5), или рекомбинантным вирусом, содержащим восстановленный VP16 TAD (RP1).В этих экспериментах уровни экспрессии гена IE после инфицирования RP5 были обозначены как «базальные» и сравнивались с идентично инфицированными клетками легкого крысы (RFL-6), почки обезьяны (Vero) и остеосаркомы человека (U2OS). Эти три пермиссивные клеточные линии служили контролем для сравнения видов-хозяев и эффектов нейрональных клеток. Во всех случаях суммарную РНК очищали из культур через 4 ч после, а кДНК, синтезированную из эквивалентных количеств общей РНК, количественно определяли с помощью количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР).После инфекций RP5 аналогичные уровни базальной экспрессии гена IE, основанные на относительном количестве копий кДНК, генерируемых на нг общей РНК, наблюдались в клетках ND-PC12, Vero и RFL6, но были по крайней мере в 10 раз выше в клетках U2OS ( ). Уровни экспрессии генов IE (ICP0, ICP4 и ICP27) были в 10–100 раз выше в RP1-, чем в инфицированных RP5 клетках ND-PC12 (). Этот уровень индукции был по крайней мере в 10 раз ниже, чем наблюдаемый в клетках, инфицированных Vero и RFL-6, что указывает на нарушение функции активации гена IE VP16 в нейрональных клетках.Кроме того, аналогичные уровни активации гена IE, наблюдаемые в клетках RFL-6 по сравнению с клетками Vero, указывают на то, что сниженная активация в нейрональных клетках происходит не только из-за их крысиного происхождения. Как и ожидалось, величина активации гена IE в клетках U2OS была ниже, чем в клетках Vero и RFL6, вероятно, из-за более высокого уровня базальной экспрессии IE, наблюдаемой в клетках U2OS, инфицированных RP5.

Влияние VP16 TAD и HMBA на экспрессию гена IE HSV-1. Клетки высевали в 6-луночные чашки и инокулировали рекомбинантными вирусами (MOI = 1), содержащими wt и удаленные VP16 TAD, RP1 и RP5, соответственно, как описано в разделе «Материалы и методы».Инфицированные культуры в ( c ) выращивали в присутствии и в отсутствие 3 мкМ HMBA. Клетки собирали через 4 часа после инфицирования, и кДНК синтезировали из эквивалентных количеств РНК из дублирующих культур на группу и количественно определяли с помощью кПЦР в трех повторностях. ( a ) Средняя базальная экспрессия гена IE инфицированных RP5 клеток. ( b ) Средние уровни экспрессии VP16 TAD-зависимого гена IE в культурах, инфицированных RP1, по сравнению с инфицированными RP5 клетками для каждой клеточной линии. ( c ) Средние уровни экспрессии гена IE, индуцированные HMBA, в культурах, инфицированных RP5, по сравнению с клетками, инфицированными RP5 в отсутствие HMBA.

Известно, что активация гена

IE является HMBA-зависимой (McFarlane et al. 1992; Smiley and Duncan 1997; Yang et al. 2002) зависимым от MOI образом. Поэтому мы дополнительно проанализировали активацию гена IE при индукции химического стресса HMBA. Инфекции RP5 были установлены в тех же четырех линиях клеток, описанных выше, в присутствии или в отсутствие HMBA. Здесь мы предположили, что HMBA будет индуцировать гены IE в нейрональных клетках, аналогично его способности индуцировать гены IE в пермиссивных клеточных линиях.Удивительно, но делеция VP16 TAD только плохо дополнялась HMBA в клетках ND-PC12 (). Это резко контрастирует со 100-1000-кратной индукцией HMBA, которая произошла в клетках Vero, RFL-6 и U2OS. Таким образом, активация гена IE за счет как VP16, так и химической индукции, по-видимому, нарушена в используемых нейронных клетках.

Субрегион трансактивации VP16N не требуется для форсколин-индуцированной реактивации

Поскольку мы ранее показали, что VP16 TAD необходим для стресс-индуцированной реактивации клеток QIF-PC12 (Miller et al.2006), представляло интерес определить, будут ли вирусы, лишенные отдельных субрегионов VP16, реактивироваться в соответствии с наблюдаемыми потенциалами активации IE. Культуры QIF-PC12 были созданы (MOI = 1) с рекомбинантными вирусами RP3 и RP4, которые лишены VP16C и VP16N, соответственно, и оценены на предмет спонтанной, HS- и форсколин-индуцированной реактивации. Как и ожидалось, низкая спонтанная реактивация наблюдалась в культурах QIF, обработанных имитатором, и RP1 реактивировался на типичных уровнях дикого типа в течение 8 дней после индукции форсколином (реактивация обнаружена в 32 из 42 обработанных культур, (32/42, 76%) и тепловой стресс (37/41, 90%) ().Напротив, RP5 был неспособен к эффективной реактивации, с обнаружением вируса только в 6,3% (3/48), 17% (8/48) и 0/48 культур в течение 8 дней после HS-, форсколина и имитационной обработки. соответственно (). Подобно RP5, RP3 () был неспособен к эффективной стресс-индуцированной и спонтанной реактивации, поскольку вирус был обнаружен только в 15% (7/48), 10% (5/48) и 0/48 культур в течение 8 дней после HS- , форсколин- и имитация лечения соответственно. Однако неожиданно оказалось, что RP4 (), который, как сообщается, значительно более ограничен в активации гена IE, чем RP3 (Yang et al.2002), была способна к реактивации, индуцированной форсколином, с обнаружением инфекционного вируса в 49% (23/47) культур по сравнению только с 15% (7/48) или 4,3% (2/47) в HS- или ложных культурах. обработки культур соответственно. Эти данные предполагают, что VP16C необходим для форсколин-индуцированной реактивации, тогда как VP16N не требуется. Более того, VP16N недостаточно для реактивации в условиях, индуцированных форсколином или HS. Эти данные показывают, что форсколин и HS могут действовать на эти клетки альтернативными способами.

N-концевая подобласть TAD VP16 необходима для индуцированной форсколином реактивации HSV-1 из клеток QIF-PC12. Клетки QIF-PC12 были созданы с ( a ) RP1, ( b ) RP3, ( c ) RP4 и ( d ) RP5 при MOI 1 в дублированных экспериментах ( n = 72 для каждого штамма. / эксперимент) и выдерживали в 12-луночных планшетах в течение 10 дней в присутствии ACV. Культуры были либо ложно обработаны (треугольник), обработаны форсколином (кружок), либо обработаны HS (квадрат) через семь дней после удаления ACV.Культуры проверяли на наличие инфекционного вируса в день 0 и ежедневно через 2 дня после обработки прямым анализом бляшек в клетках U2OS с добавлением HMBA. Данные представляют собой среднее значение (± стандартное отклонение) двух независимых экспериментов.

VP16N более эффективно трансактивирует гены IE, чем VP16C в нейрональных клетках

Чтобы определить, были ли неожиданные фенотипы реактивации RP3 и RP4 обусловлены требованиями субрегиона TAD для активации гена IE, специфичной для нейрональных клеток, уровень Экспрессию гена IE для этих мутантов оценивали в клетках ND-PC12.Поскольку наши первоначальные эксперименты показали, что активация экспрессии гена IE была однозначно нарушена в клетках ND-PC12 независимо от влияния видов, уровни экспрессии генов сравнивали в клетках ND-PC12 с контрольными клетками Vero. Обе клеточные линии были инфицированы (MOI = 1), и экспрессию гена IE оценивали, как описано выше. Здесь присутствие подобластей VP16 заметно влияло на наблюдаемый уровень экспрессии гена IE. Как и ожидалось, экспрессия гена IE была индуцирована VP16 в ~ 100 раз в инфицированных RP1 ND-PC12 () и ~ в 1000 раз в клетках Vero () через 4 часа после инфицирования, соответственно.Напротив, RP-3 индуцировал экспрессию гена IE в 3 раза в клетках ND-PC12 () и от 65 до 950 раз в клетках Vero (), что соответствует приблизительно 10-кратному или большему снижению по сравнению с соответствующими культурами, инфицированными RP1. Кроме того, экспрессия гена IE в инфицированных RP4 клетках ND-PC12 и Vero составляла менее 10% от таковых, инфицированных RP3, так что уровни экспрессии в клетках ND-PC12 () были близки к пределу обнаружения. Важно отметить, что RP4 был более аттенуирован при активации гена IE как в нейрональных (), так и в ненейрональных клетках (), чем RP3.Эти данные подтверждают, что VP16N более важен, чем VP16C, для трансактивации генов IE во время литической инфекции нейрональных и ненейрональных клеток. Как ни странно, способность RP4 реактивироваться более эффективно, чем RP3, когда индуцируется форсколином, не связана с большей способностью RP4 индуцировать активацию гена IE в ранние сроки после заражения.

Относительные уровни экспрессии гена IE во время инфицирования клеток Vero и ND-PC12 RP1, RP3 и RP4. Клетки ( a ) Vero и ( b ) ND-PC12 инокулировали RP1, RP5 или рекомбинантными вирусами, лишенными субрегионов VP16C и VP16N VP16 TAD, RP3 и RP4, соответственно (MOI = 1).Вирусные инфекции, очистку РНК, синтез и количественное определение кДНК выполняли, как описано в. Средние (± SD) уровни экспрессии гена IE, зависимые от субрегиона VP16 TAD, в культурах, инфицированных RP1, RP3 и RP4, выражены относительно инфицированных RP5 клеток (α0, n = 1; α4 и α27, n = 2).

VP16N необходим для эффективной репликации вируса в нейрональных клетках

Пониженный уровень экспрессии гена IE в инфицированных RP4 клетках по сравнению с таковым в инфицированных RP3 клетках согласуется с пониженной эффективностью репликации RP4 в клетках Vero (Tal-Singer и другие.1999). Чтобы определить, вызваны ли противоположные фенотипы активации гена IE (RP3> RP4) и форсколин-индуцированной реактивации (RP4> RP3) этих рекомбинантных вирусов специфическими для нейронов фенотипами репликации, мы оценили эффективность репликации вируса обоих штаммов при ND- Клетки PC12 по анализу кривой роста. После одной недели индуцированной NGF дифференцировки клетки ND-PC12 инфицировали RP3 и RP4 при MOI 1 и 10. Культуры инфицировали RP1 и RP5 в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.В соответствии с их относительной эффективностью репликации в клетках Vero (Tal-Singer et al. 1999), кинетика репликации RP3 после инфицирования клеток ND-PC12 при MOI, равном 1, была ниже, чем у RP1, но существенно выше, чем у RP4 и RP5 (). Фактически, для обнаружения репликации RP4 требовалось инфицирование клеток ND-PC12 при MOI 10, и выходы все еще не достигали урожайности культур, инфицированных RP3 при MOI 1 (). Эти данные показывают, что относительная эффективность репликации вируса в клетках ND-PC12 согласуется с их пониженной эффективностью репликации в клетках Vero (Tal-Singer et al.1999). Кроме того, характеристики репликации RP3 и RP4 соответствуют большему потенциалу активации гена IE RP3 в клетках ND-PC12 и Vero (). В совокупности полученные данные указывают на то, что усиленный фенотип реактивации RP4, вызванный форсколином, не является результатом 1) усиленной активации гена IE или 2) эффективной репликации в нейроноподобных клетках, а скорее, по-видимому, специфичен для процессов, непосредственно связанных с реактивацией. покоящегося генома.

Рост рекомбинантов HSV-1 в клетках ND-PC12.Культуры PC12 дифференцировали нейронами в течение 7 дней и инфицировали при MOI ( a ) 1 и ( b ) 10. В указанные моменты времени собирали культуры в трех экземплярах, трижды замораживали и размораживали, а выход вирусов измеряли в двух экземплярах. анализом бляшек на клетках U2OS с добавлением HMBA.

Обсуждение

Мы использовали серию мутантов VP16, несущих различные делеции TAD (Tal-Singer et al. 1999), чтобы оценить важность отдельных субрегионов VP16 TAD (VP16N и VP16C) для экспрессии гена IE и стресса. индуцированная реактивация HSV-1 из QIF-PC12.Наши исследования активации гена IE в различных клеточных линиях показали, что нейрональные клетки гораздо менее эффективны в поддержке активации VP16 TAD-зависимого IE гена, чем ненейрональные клетки, и что делеция N- или C-концевых субобластей VP16 TAD существенно снижает IE. активация гена и последующая репликация вируса в нейрональных клетках. Используя модель QIF-PC12, мы наблюдали, что рекомбинантный вирус, лишенный VP16C (RP3), был неспособен к реактивации, индуцированной HS и форсколином, тогда как рекомбинантный вирус, лишенный VP16N (RP4), умеренно реактивировался после индукции форсколином, но был неспособен к индуцированной HS. реактивация.Эти находки показывают, что делеция C- или N-конца VP16 TAD обеспечивает уникальные процессно-зависимые функции во время реактивации и репликации вируса. Кроме того, результаты подтверждают интерпретацию, что индукция форсколина (химическая) и HS (физическая) из состояния покоя, скорее всего, включает в себя разные процессы в нашей системе.

HSV-1 демонстрирует ослабленную инфекцию нейронов во многих модельных системах и у людей. Ослабленная инфекция in vivo является результатом влияния местного иммунного ответа (Liu et al.1996; Sainz and Halford 2002), а также внутринейрональные процессы (Bloom and Stevens 1994). Внутринейрональные события включают множество биохимических процессов, таких как повышенная выживаемость (Garrido et al. 1999), отсутствие клеточных факторов, необходимых для продуктивной инфекции (например, cdks (Schang et al. 2002), выработка внутринейрональных ингибирующих белков (Zhangfei) (Akhova) et al. 2005), отсутствие надежной реакции на повреждение ДНК (Lilley et al. 2005), обильная экспрессия LAT (Maillet et al. 2006), деградация вирусного белка в нейронах (Eom et al.2004), а также уникальную регуляцию экспрессии вирусных генов в нейронах (Pesola et al. 2005; Bertke et al. 2011). Наши результаты добавляют к растущему количеству доказательств того, что репликация в нейронах подавляется уникальными функциями VP16 по сравнению с активацией гена IE в нейрональных клетках. Мы обнаружили, что во время инфекции нейронные клетки крысы поддерживают значительно меньшую экспрессию гена IE, чем наблюдаемая в пермиссивных клеточных линиях приматов. Одна из гипотез предполагает, что тонкие различия в первичной структуре белков Oct-1 хозяина могут быть ответственны за этот результат (Cleary et al.1993; Судзуки и др. 1993). Однако эффективная активация гена IE, наблюдаемая в клеточной линии крысиного RFL-6, может опровергать это мнение. Более того, снижение уровня активации гена IE в клетках ND-PC12 не было связано с более высокой экспрессией базального гена IE в этих клетках, таким образом, VP16, по-видимому, имеет пониженную активность в нейрональной среде, аналогичную наблюдаемой другими (Kemp and Latchman 1989 ; Wheatley et al. 1990; Nichol et al. 1996; Weir 2001). Возможное объяснение пониженной активации гена IE, опосредованной VP16, в клетках ND-PC12 заключается в том, что оба VP16 (Kim et al.2012) и HCF-1 (Kristie et al. 1999) преимущественно локализуются в цитоплазме нейронов и поэтому не присутствуют на соответствующих уровнях в ядре, чтобы способствовать эффективной экспрессии гена IE.

В соответствии с уникальным фенотипом нейронов, VP16-независимая активация гена IE в нейрональных клетках лишь минимально реагировала на HMBA (0,25–0,65-кратное увеличение) по сравнению с 50–1000-кратным увеличением в клетках RFL-6 и Vero. Это новое открытие противоречит способности HMBA активировать гены IE независимо от VP16 в пермиссивных клетках (McFarlane et al.1992; Смайли и Дункан 1997; Ян и др. 2002). Хотя точный механизм HMBA-комплементации генов IE неясен, возможно, что отсутствие клеточного стрессового ответа или состояния вирусной ДНК в нейронах вносит свой вклад (Su et al. 2002; Lilley et al. 2005; Terry-Allison и др. 2007; Блум и др. 2010). Интересно, что HMBA, как было показано, усиливает транскрипцию гена IE в инфицированных HSV-1 эмбриональных куриных нейронах ex vivo (Hafezi et al. 2012). Однако, поскольку эти исследования включали инфицирование культур эксплантатов тройничных ганглиев, состоящих из макроглиальных клеток и нейронов, в присутствии HMBA в течение 24 часов, неясно, зависела ли усиленная экспрессия IE от вторичной передачи сигналов через клетки макроглии и / или длинной продолжительность химического воздействия.С другой стороны, наблюдаемые различия могут быть обусловлены различиями между фоном цыплят и крыс.

Затем мы исследовали относительные потребности двух субрегионов VP16 TAD для реактивации из состояния покоя HSV-1. Субрегионы VP16N и VP16C способны независимо активировать транскрипцию с помощью уникальных механизмов (Seipel et al. 1992; Goodrich et al. 1993; Regier et al. 1993; Sullivan et al. 1998; Ikeda et al. 2002) и их делеций. не влияют на домен VIC. Мы использовали клетки QIF-PC12 для исследования этой области, поскольку модель позволяет установить латентное состояние, при котором можно получить эквивалентное количество копий вирусного генома мутантных вирусов и вирусов дикого типа, а реактивацию можно вызвать с помощью физических, химических и биологические стимулы, даже с мутантами, которые обладают чрезвычайно плохими репликационными свойствами (Danaher et al.1999a, 1999b, 2001, 2005). Кроме того, отсутствие иммунных и пермиссивных клеток позволяет нам наблюдать уникальные нейрональные события (Liu et al. 2000, 2001; Decman et al. 2005). Рекомбинантные вирусы, лишенные отдельных субрегионов VP16C (RP3) или VP16N (RP4), значительно снижали индуцированную стрессом реактивацию из клеток QIF-PC12 по сравнению с RP1, который содержит интактный VP16 TAD. Подобно RP5, RP3 не реактивировался в значительной степени после индукции HS или форсколином, что указывает на то, что подобласть VP16C необходима для эффективной стресс-индуцированной реактивации.Напротив, RP4 реактивировался после индукции лечением форсколином, хотя и на более низких уровнях по сравнению с RP1. Таким образом, эти данные показывают, что VP16N не требуется для индуцированной форсколином реактивации с латентного периода, хотя он необходим для активации экспрессии гена IE на ранних стадиях первичной инфекции пермиссивных клеток (Tal-Singer et al. 1999; Yang et al. 2002 г.).

Поскольку RP4 значительно более подвержен риску активации гена IE по сравнению с RP3 в пермиссивных клетках (Tal-Singer et al.1999; Ян и др. 2002) было удивительно, что RP3 был неспособен к реактивации, вызванной стрессом, тогда как RP4 был способен к значительной реактивации, индуцированной форсколином. Чтобы определить, является ли этот результат следствием трансактивационных свойств, специфичных для нейронных клеток, активацию гена IE измеряли в клетках ND-PC12. В соответствии с относительным влиянием отдельных субрегионов VP16 TAD (Tal-Singer et al. 1999; Yang et al. 2002), активация гена IE была снижена на 80–90% и 99% по сравнению с исходным вирусом (RP1 ), после инфицирования клеток Vero рекомбинантами, лишенными подобластей VP16C (RP3) и VP16N (RP4), соответственно ().Такие же иерархические эффекты наблюдались после инфицирования нейрональных клеток (), хотя степень снижения была значительно более выраженной. Важно отметить, что выход вируса после инфицирования нейрональных клеток этими же рекомбинантными вирусами соответствовал их способности эффективно или неэффективно экспрессировать гены IE. Одним из объяснений противоположных требований к субрегионам VP16N и VP16C для активации гена IE и вызванной стрессом реактивации может быть состояние вирусного генома, которое, как ожидается, будет различным на ранних и поздних стадиях после доставки вирусной ДНК в ядро клетки.Интересно, что подобласть VP16N (присутствует в RP3 и отсутствует в RP4) имеет решающее значение для сильного взаимодействия с компонентом комплекса коактиватора медиатора MED25 (Yang et al. 2004) и имеет решающее значение для эффективной VP16-опосредованной транскрипции голых матриц ДНК (Ikeda и др. 2002). Этим можно объяснить более высокую активацию гена IE и потребность в выходе вируса после инфицирования пермиссивных и нейрональных клеток RP3 по сравнению с RP4. Напротив, подобласть VP16C связывает многочисленные факторы транскрипции, включая TBP (Stringer et al.1990), TFIIA (Kobayashi et al. 1998), TFIIB (Roberts et al. 1993), субъединица 32 кДа TFIID (Klemm et al. 1995) и субъединица p62-Tfb1 TFIIH (Xiao et al. 1994; Langlois et al. 2008) и необходим для взаимодействия VP16 с гистонацетилтрансферазой CBP и in vitro трансактивации матриц хроматина (Ikeda et al. 2002). Эти особенности могут объяснять уникальную потребность в этой специфической области во время реактивации латентных вирусных геномов, которые, как предполагается, связаны с нуклеосомами в структурах хроматина в клетках QIF-PC12 (Su et al.2002; Ferenczy et al. 2011), как и во время латентного периода HSV-1 в ганглиях тройничного нерва (Deshmane and Fraser 1989).

В заключение, наши данные показывают, что нейроны уникальны в регуляции активации гена IE, и VP16 TAD имеет решающее значение для реактивации HSV-1 из состояния покоя в нейронах. Текущие данные подтверждают, что VP16 мигрирует из цитоплазмы в ядро ​​в ответ на стрессовые условия, когда VP16N является критическим для реактивации. Нейронные факторы, регулирующие эти процессы, еще предстоит идентифицировать.

Сноски

Конфликт интересов: Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов, связанного с этим исследованием.

Ссылки

• Ace CI, McKee TA, et al. Конструирование и характеристика мутанта вируса простого герпеса типа 1, неспособного индуцировать немедленную раннюю экспрессию гена. J Virol. 1989. 63 (5): 2260–2269. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Ахова О., Бейнбридж М. и др. Белок, связывающий фактор клетки-хозяина, Zhangfei ингибирует репликацию вируса простого герпеса.J Virol. 2005. 79 (23): 14708–14718. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Бертке А.С., Свансон С.М. и др. A5-положительные первичные сенсорные нейроны не допускают продуктивной инфекции вирусом простого герпеса 1 in vitro. J Virol. 2011. 85 (13): 6669–6677. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Block T, Barney S, et al. Длительное инфицирование вирусом простого герпеса типа 1 клеток PC12, обработанных фактором роста нервов. J Gen Virol. 1994. 75 (9): 2481–2487. [PubMed] [Google Scholar]
• Блум Д.К., Джордани Н.В. и др.Эпигенетическая регуляция экспрессии латентного гена HSV-1. Biochim Biophys Acta. 2010; 1799: 246–256. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Блум, округ Колумбия, Стивенс Дж. Дж. Нейрон-специфическое ограничение рекомбинантного вируса простого герпеса отображается на ген UL5. J Virol. 1994. 68 (6): 3761–3772. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Cleary MA, Stern S, et al. Дифференциальный положительный контроль с помощью Oct-1 и Oct-2: активация транскрипционно молчащего мотива посредством корекрутирования Oct-1 и VP16.Genes Dev. 1993. 7 (1): 72–83. [PubMed] [Google Scholar]
• Cohrs J, Randall J, et al. Анализ отдельных ганглиев тройничного нерва человека на латентные нуклеиновые кислоты вируса простого герпеса типа 1 и вируса ветряной оспы с использованием ПЦР в реальном времени. J Virol. 2000. 74 (24): 11464–11471. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Cousens DJ, Greaves R и др. С-концевые 79 аминокислот регуляторного белка вируса простого герпеса, Vmw65, эффективно активируют транскрипцию в клетках дрожжей и млекопитающих химерных ДНК-связывающих белков.EMBO J. 1989; 8 (8): 2337–2342. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Данахер Р.Дж., Джейкоб Р.Дж. и др. Тепловой стресс активирует производство вируса простого герпеса типа 1 из неподвижно инфицированных нейронно дифференцированных клеток PC12. J NeuroVirol. 1999a; 5 (4): 374–383. [PubMed] [Google Scholar]
• Данахер Р.Дж., Джейкоб Р.Дж. и др. Установление неактивной инфекции вируса простого герпеса типа 1 в нейронно-дифференцированных клетках PC12. J NeuroVirol. 1999b; 5 (3): 258–267. [PubMed] [Google Scholar]
• Данахер Р.Дж., Джейкоб Р.Дж. и др.Ингибиторы гистон-деацетилазы индуцируют реактивацию вируса простого герпеса типа 1 в нейрональных клетках независимым от транскрипта образом, связанным с латентным периодом. J NeuroVirol. 2005. 11 (3): 306–317. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Данахер Р.Дж., Савеллс-Арб А.Д. и др. Покой герпеса в нейрональных клетках: активация вируса, индуцированная полипептидом, активирующим аденилатциклазу гипофиза (PACAP), включает путь протеинкиназы А. J NeuroVirol. 2001. 7 (2): 163–168. [PubMed] [Google Scholar]
• Decman V, Kinchington PR, et al.Гамма-интерферон может блокировать реактивацию вируса простого герпеса 1 типа с латентного периода, даже при наличии поздней экспрессии генов. J Virol. 2005. 79 (16): 10339–10347. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Deshmane SL, Fraser NW. В латентный период ДНК вируса простого герпеса типа 1 связана с нуклеосомами в структуре хроматина. J Virol. 1989. 63 (2): 943–947. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Eom CY, Heo WD, et al. Нервный белок F-бокса NFB42 опосредует ядерный экспорт белка инициатора репликации вируса простого герпеса типа 1 (белок UL9) после вирусной инфекции.Proc Natl Acad Sci USA. 2004. 101 (12): 4036–4040. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Ferenczy MW, Ranayhossaini DJ, et al. Активность ICP0, участвующая в обращении подавления молчания покоящегося вируса простого герпеса 1. J Virol. 2011. 85 (10): 4993–5002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Гарридо Дж. Дж., Карничеро Э. и др. Дифференциальное влияние на выживаемость нейрональных и ненейрональных клеток после инфицирования мутантами вируса простого герпеса типа 1. J NeuroVirol.1999. 5 (3): 280–288. [PubMed] [Google Scholar]
• Гудрич Дж. А., Хои Т. и др. TAF (II) 40 Drosophila взаимодействует как с доменом активации VP16, так и с базальным фактором транскрипции TFIIB. Клетка. 1993. 75 (5): 519–530. [PubMed] [Google Scholar]
• Хафези В., Лоренцен ЕС и др. Проникновение вируса простого герпеса типа 1 (HSV-1) в дистальные аксоны нейронов тройничного нерва способствует началу непродуктивной бессимптомной инфекции. PLoS Pathog. 2012; 8 (5): e1002679. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Икеда К., Стюлер Т. и др.Области h2 и h3 домена активации белка 16 вириона простого герпеса стимулируют транскрипцию посредством различных молекулярных механизмов. Гены Клетки. 2002. 7 (1): 49–58. [PubMed] [Google Scholar]
• Кемп Л.М., Лачман Д.С. Регулируемая транскрипция немедленных ранних генов вируса простого герпеса в клетках нейробластомы. Вирусология. 1989. 171 (2): 607–610. [PubMed] [Google Scholar]
• Kim JY, Mandarino A, et al. Временное обращение молчания эписомы предшествует VP16-зависимой транскрипции во время реактивации латентного HSV-1 в нейронах.PLoS Pathog. 2012; 8 (2): e1002540. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Клемм Р.Д., Гудрич Дж. А. и др. Молекулярное клонирование и экспрессия субъединицы 32 кДа человеческого TFIID выявляют взаимодействия с VP16 и TFIIB, которые опосредуют активацию транскрипции. Proc Natl Acad Sci USA. 1995. 92 (13): 5788–5792. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Knez J, Bilan PT, et al. Одиночная аминокислотная замена в VP16 вируса простого герпеса 1 типа ингибирует связывание с вирионным белком отключения хозяина и несовместима с ростом вируса.J Virol. 2003. 77 (5): 2892–2902. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Кобаяши Н., Хорн П.Дж. и др. Активность сборки DA-комплекса, необходимая для активации транскрипции VP16C. Mol Cell Biol. 1998. 18 (7): 4023–4031. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Kristie TM, Vogel JL, et al. Ядерная локализация фактора C1 (фактора клетки-хозяина) в сенсорных нейронах коррелирует с реактивацией вируса простого герпеса с латентного периода. Proc Natl Acad Sci USA. 1999. 96 (4): 1229–1233.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Lam Q, Smibert CA, et al. Вирус простого герпеса VP16 спасает вирусную мРНК от разрушения функцией отключения вириона-хозяина. EMBO J. 1996; 15 (10): 2575–2581. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Langlois C, Mas C, et al. Структура ЯМР комплекса между субъединицей Tfb1 TFIIH и активационным доменом VP16: структурное сходство между VP16 и p53. J Am Chem Soc. 2008. 130 (32): 10596–10604. [PubMed] [Google Scholar]
• Lilley CE, Carson CT, et al.Белки репарации ДНК влияют на жизненный цикл вируса простого герпеса 1. Proc Natl Acad Sci USA. 2005. 102 (16): 5844–5849. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Лю Т., Ханна К.М. и др. Гамма-интерферон может предотвратить реактивацию вируса простого герпеса 1 типа из-за латентного периода в сенсорных нейронах. J Virol. 2001. 75 (22): 11178–11184. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Лю Т., Ханна К.М. и др. CD8 (+) Т-клетки могут блокировать реактивацию вируса простого герпеса типа 1 (HSV-1) из-за латентного периода в сенсорных нейронах.J Exp Med. 2000. 191 (9): 1459–1466. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Лю Т., Тан QH и др. Воспалительная инфильтрация ганглия тройничного нерва после инфекции роговицы, вызванной вирусом простого герпеса 1 типа. J Virol. 1996. 70 (1): 264–271. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Maillet S, Naas T, et al. Нейроны, латентно инфицированные вирусом простого герпеса 1 типа, по-разному экспрессируют транскрипты, связанные с латентностью, и транскрипты ICP0. J Virol. 2006. 80 (18): 9310–9321. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• McFarlane M, Daksis JI, et al.Гексаметилен-бисацетамид стимулирует немедленную раннюю экспрессию гена вируса простого герпеса в отсутствие трансиндукции с помощью Vmw65. J Gen Virol. 1992. 73 (2): 285–292. [PubMed] [Google Scholar]
• Miller CS, Danaher RJ, et al. ICP0 не требуется для эффективной стресс-индуцированной реактивации вируса простого герпеса типа 1 из культивированных покоящихся инфицированных нейрональных клеток. J Virol. 2006. 80 (7): 3360–3368. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Никол П.Ф., Чанг JY и др.Экспрессия гена вируса простого герпеса в нейронах: синтез вирусной ДНК является критическим регуляторным событием в точке ветвления между литическим и латентным путями. J Virol. 1996. 70 (8): 5476–5486. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Pesola JA, Zhu J, et al. Немедленно-ранняя и ранняя экспрессия гена вируса простого герпеса 1 во время реактивации с латентного периода в условиях, предотвращающих образование инфекционного вируса. J Virol. 2005. 79 (23): 14516–14525. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Пун APW, Ройзман Б.Фенотип in vitro и в инфицированных клетках транс-индуцирующего фактора 1 альфа вируса простого герпеса (VP16), несущего чувствительные к температуре мутации, введенные путем замены цистеина. J Virol. 1995. 69 (12): 7658–7667. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Regier JL, Shen F, et al. Структура ароматических и гидрофобных аминокислот, критических для одного из двух субдоменов активатора транскрипции VP16. Proc Natl Acad Sci USA. 1993. 90 (3): 883–887. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Roberts SGE, Ha I, et al.Для активации транскрипции необходимо взаимодействие между кислотным активатором и фактором транскрипции TFIIB. Природа. 1993. 363 (6431): 741–744. [PubMed] [Google Scholar]
• Ройзман Б., Книпе Д.М. Вирусы простого герпеса и их размножение. В: Книп Д.М., Хоули П.М., Гриффин Д.Е., Мартин М.А., Лэмб Р.А., Ройзман Б., Страус С.Е., редакторы. Области вирусологии. Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; Филадельфия: 2001. [Google Scholar]
• Сайнс Б., Хэлфорд В.П. Альфа / бета-интерферон и гамма-интерферон взаимодействуют друг с другом, подавляя репликацию вируса простого герпеса 1 типа.J Virol. 2002. 76 (22): 11541–11550. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Сотелл Н.М., Тризенберг С.Дж. и др. Серин 375 VP16 является критическим детерминантом выхода вируса простого герпеса из латентного периода in vivo. J NeuroVirol. 2011. 17 (6): 546–551. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Шанг Л.М., Бэнти А. и др. Индуцированная эксплантатом реактивация вируса простого герпеса происходит в нейронах, экспрессирующих ядерные cdk2 и cdk4. J Virol. 2002. 76 (15): 7724–7735. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Schmelter J, Knez J, et al.Идентификация и характеристика небольшого модульного домена в блокирующем белке хозяина вируса простого герпеса, достаточном для взаимодействия с VP16. J Virol. 1996. 70 (4): 2124–2131. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Зайпель К., Георгиев О. и др. Различные домены активации стимулируют транскрипцию из удаленных (энхансер) и проксимальных (промотор) положений. EMBO J. 1992; 11 (13): 4961–4968. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Smibert CA, Popova B, et al. Вирус простого герпеса VP16 образует комплекс с вирионным белком-хозяином vhs.J Virol. 1994. 68 (4): 2339–2346. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Смайли Дж. Р., Дункан Дж. Усечение С-концевого кислого домена активации транскрипции VP16 вируса простого герпеса дает фенотип, сходный с фенотипом мутации вставки линкера in1814. J Virol. 1997. 71 (8): 6191–6193. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Steiner I, Spivack JG, et al. Мутант вируса простого герпеса типа 1, содержащий нетрансиндуцирующий белок Vmw65, вызывает латентную инфекцию in vivo в отсутствие репликации вируса и эффективно реактивируется из эксплантированных ганглиев тройничного нерва.J Virol. 1990. 64 (4): 1630–1638. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Stringer KF, Ingles CJ, et al. Прямое и селективное связывание кислого домена активации транскрипции с TATA-бокс-фактором TFIID. Природа. 1990. 345 (6278): 783–786. [PubMed] [Google Scholar]
• Su YH, Moxley MJ, et al. Стабильность и циркуляризация геномов вируса простого герпеса типа 1 в неподвижно инфицированных культурах PC12. J Gen Virol. 2002; 83 (Pt 12): 2943–2950. [PubMed] [Google Scholar]
• Салливан С.М., Хорн П.Дж. и др.Мутационный анализ области активации транскрипции белка VP16 вируса простого герпеса. Nucleic Acids Res. 1998. 26 (19): 4487–4496. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Сузуки Н., Питер В. и др. Oct-1 мыши содержит составной гомеодомен Oct-1 и Oct-2 человека. Nucleic Acids Res. 1993. 21 (2): 245–252. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Тал-Сингер Р., Пичьянгкура Р. и др. Домен активации транскрипции VP16 необходим для эффективного инфицирования и установления латентного периода HSV-1 в периферической и центральной нервной системах мышей.Вирусология. 1999. 259 (1): 20–33. [PubMed] [Google Scholar]
• Terry-Allison T, Smith CA, et al. Расслабленная репрессия геномов вируса простого герпеса типа 1 в нейронах тройничного нерва мышей. J Virol. 2007. 81 (22): 12394–12405. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Томпсон Р.Л., Престон С.М. и др. Синтез de novo VP16 координирует выход из латентного периода HSV in vivo. PLoS Pathog. 2009; 5 (3): e1000352. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Triezenberg SJ, Kingsbury RC, et al.Функциональное рассечение VP16, трансактиватора экспрессии немедленного раннего гена вируса простого герпеса. Genes Dev. 1988. 2 (6): 718–729. [PubMed] [Google Scholar]
• Валый-Надь Т., Дешман С. и др. Индукция клеточных факторов транскрипции в ганглиях тройничного нерва мышей путем скарификации роговицы, инфекции вируса простого герпеса типа 1 и эксплантации ганглиев тройничного нерва. J Virol. 1991. 65 (8): 4142–4152. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Уокер С., Гривз Р. и др.Активация транскрипции кислотным доменом Vmw65 требует целостности домена и включает дополнительные детерминанты, отличные от тех, которые необходимы для связывания TFIIB. Mol Cell Biol. 1993. 13 (9): 5233–5244. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Weinheimer SP, Boyd BA, et al. Делеция открытой рамки считывания VP16 вируса простого герпеса типа 1. J Virol. 1992. 66 (1): 258–269. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Weir JP. Заражение человеческих NT2-клеток и дифференцированных NT-нейронов вирусом простого герпеса и векторами вируса простого герпеса, неспособными к репликации.J NeuroVirol. 2001. 7 (1): 43–51. [PubMed] [Google Scholar]
• Уитли С.К., Кемп Л.М. и др. Клеточные линии, полученные из нейронов ганглия задних корешков, непермиссивны для HSV и после инфекции экспрессируют только латентный транскрипт. Exp Cell Res. 1990. 190 (2): 243–246. [PubMed] [Google Scholar]
• Wysocka J, Herr W. Комплекс, индуцированный вирусом простого герпеса, VP16: механизмы регулятора. Trends Biochem Sci. 2003. 28 (6): 294–304. [PubMed] [Google Scholar]
• Сяо Х., Пирсон А. и др.Связывание базального фактора транскрипции TFIIH с кислыми активационными доменами VP16 и p53. Mol Cell Biol. 1994. 14 (10): 7013–7024. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Ян Ф.Дж., ДеБомонт Р. и др. Рекрутируемый активатором кофактор / коактиватор-медиатор субъединица ARC92 является функционально важной мишенью активатора транскрипции VP16. Proc Natl Acad Sci USA. 2004. 101 (8): 2339–2344. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Ян В.С., Деви-Рао Г.В. и др. Общие и специфические изменения в программировании глобальной экспрессии вирусных генов во время инфицирования мутантами вируса простого герпеса типа 1 с дефицитом активации VP16.J Virol. 2002. 76 (24): 12758–12774. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

* RP5 * New * Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice PDF / EPUB

Descargar Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Практика Libro Gratis PDF / EPUB leer en línea

==== >>> Скачать Pdf Aquí <=====

==== >>> Lee El Pdf Aquí <=====

Delta’s Ключ к TOEFL iBT®: Complete Skill Practice. Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https com / Deltas-Key-TOEFL-iBT®-Complete / dp / Delta’s Key to the TOEFL iBT®: Complete Skill Practice — это всеобъемлющее учебное пособие для учащихся среднего и продвинутого уровней английского языка, которые изучают Интернет-тест по английскому языку (TOEFL iBT®) Delta’s Key to the TOEFL iBT: Complete Skill Practice Ваш браузер показывает, посетили ли вы эту ссылку https wiki- Study com / deltas-key-to-the-toefl-ibt-complete-skill-Practice / Delta’s Key to the TOEFL iBT® Complete Skill Practice-Fourth Edition, i всесторонний курс для изучающих английский язык выше среднего и продвинутого, которые изучают Интернет-тест по английскому языку как иностранному (TOEFL iBT) Видео4: 51Видеотур: Ключ Нэнси Галлахер от Delta к TOEFL iBT1K просмотровYouTube3yr4: 44TOEFL Practice Test 3 — Прослушивание — Вопросы 1-51 1K просмотровYouTube7yr5: 09TOEFL Практический тест 1 — Прослушивание — Вопросы 6-10592 просмотровYouTube7yr6: 30TOEFL Практический тест 3 — Прослушивание — Вопросы 17-22211 просмотровYouTube5: 44TOEFL Практический тест 1 — Прослушивание — Вопросы 11-16554 просмотраYouTube7yr3: 45TOEFL Практический тест 2 — Прослушивание — Вопросы 1-52 1K просмотровYouTube7yr8: 21Как улучшить свой TOEFL iBT Чтение Результаты прослушивания787 просмотровYouTube3yr6: 41TOEFL Практический тест 1 — Прослушивание — Вопросы 17-22490 просмотровYouTube7yr7: 26TOEFL Практический тест 1 — Прослушивание — ВопросыouTube 29-347481 просмотровY 17TOEFL Practice Test 2 — Speaking — Question 64 3K просмотровYouTube7yrБольше видеоПолезны ли эти ссылки? ДаNoDelta’s Key to the TOEFL iBT: Complete Skill P ractice Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https stevensbooks com / products / deltas-key-to-the-toefl-ibt-complete-skill-Practice-4th-edition-with-mp3-cdDelta’s Key to the TOEFL iBT® is набор высококачественных практических материалов для студентов, готовящихся к тесту на знание английского как иностранного через Интернет (TOEFL iBT) Впервые введенный в 2005 году, TOEFL iBT представляет собой широко используемую оценку уровня владения английским языком в областях умений и навыков. чтение, слушание, говорение и письмо Delta’s Key к TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https bookdepository com / Deltas-Key-TOEFL-Ibt-r-Complete-Skill-Practice-Nancy -Gallagher / 9781621677000Delta’s Key to the TOEFL iBT (R) Complete Skill Practice — это комплексное учебное пособие для изучающих английский язык со средним и продвинутым уровнями, которые изучают Интернет-тест по английскому языку как иностранному (TOEFL iBT (R)) 9781621677000: ключ Delta к TOEFL iBT®: завершен e Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https://ebooks.com/9781621677000 / Deltas-Key-TOEFL-iBT®-Complete- / plpDelta’s Key to the TOEFL iBT®: Complete Skill Practice — это комплексное учебное пособие для учащихся среднего и продвинутого уровней. английского языка, которые изучают Интернет-тест по английскому языку как иностранному (TOEFL iBT®) (PDF) TOEFL_Detals Ключ к TOEFL iBT pdf | Ана Паула Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https://scademia edu / 32686654 / TOEFL_Detals_Key_To_The_TOEFL_iBT_pdf2 КЛЮЧ DELTA К TOEFL IBT® ТЕСТОВЫЙ ОБРАЗЕЦ TOEFL iBT® TOEFL® TOEFL® PBL 120 677100 600 80 550 Advanced Skill Practice — это полный курс подготовки к экзамену для продвинутых и изучающих английский язык Delta’s Key to the TOEFL iBT: Advanced Skill Practice With Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https wiki-study com / deltas-key-to- the-toefl-ibt-advanced-skill-Practice-with-cd-audio / Delta s Key to the TOEFL iBT: Advanced Skill Practice — это комплексный курс подготовки к экзамену для продвинутых и средних студентов, изучающих английский язык, которые изучают Английский как иностранный. Формат курса очень хорошо работает в классе и для самостоятельного изучения. Скачать [Pdf] Delta’s Key to the TOEFL iBT: Advanced В вашем браузере указано, посещали ли вы эту ссылкуhttps idocslide org / document / dow nload-pdf-delta-x27-s-key-to-the-toefl-ibt-advanced-skill-Practice-full-booksDelta’s Key to the TOEFL iBT: Advanced Skill Practice скачать pdf, Delta’s Key к TOEFL iBT: Advanced Skill Практическая загрузка аудиокниги,… Ключ Delta к TOEFL Ibt (r) Полная практика навыков Ваш браузер указывает, если вы посетили эту ссылку https в / Deltas-Key-Toefl-Nancy-Gallagher / dp / in — Купить ключ Delta к TOEFL Ibt (r) Заполните онлайн-книгу о практических навыках по лучшим ценам в Индии в разделе «Ключ от Delta к TOEFL Ibt» (r) Полные обзоры книг по навыкам и сведения об авторах и многое другое в разделе «Бесплатная доставка по квалифицированным заказам» Delta’s Key to the TOEFL iBT: Complete Практика навыков Ваш браузер указывает, посещали ли вы эту ссылку https com au / Deltas-Key-TOEFL-iBT-Complete / dp / Delta’s Key to the TOEFL iBT: Complete Skill Practice, Fourth Edition with mp3 CD Мягкая обложка — Нэнси, 1 августа 2016 г. Галлахер (автор), Патрисия Бреннер (редактор), Линда Эймс (редактор) 4 Звёзд 9 из 5 звёзд 31 оценкаБольше результатов

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Descargar Libro:

PDF Скачать Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Libro Gratis En Línea

PDF Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice

Gratis ePub Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Descargar

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Audiobook Descargar

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Полная практика навыков Читать онлайн

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Epub

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Pdf Полная электронная книга

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Amazon Gratis

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Audiobook

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Pdf Online

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practi). ce Descargar Libro Gratis PDF / EPUB leer en línea

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Mobi

Delta’s Key to the TOEFL Ibt (r) Complete Skill Practice Pdf Gratis

Коробка из 100 Leco 810-034 -100 8-дюймовый диск из карбида кремния

Условие:	Новое — Открытая коробка: Товар в отличном, новом состоянии, без функциональных дефектов.Товар может отсутствовать в оригинале упаковка и могла быть использована для тестирования или демонстрационных целей. Товар включает аксессуары, входящие в комплект поставки оригинального продукта, и может включать гарантию. См. Список продавца для получения полной информации и описания. … Прочитайте больше о состоянии	Торговая марка:	LECO
Торговая марка:	LECO	Модель:	810-034-100
Состояние продукта:	Новое без заводской упаковки	MPN:	810-034-100
Номер модели:	810-034-100	UPC:	непригодный
EAN:	непригодный

Идеальное состояние трактора John Deere с узкой передней частью G и Bandai Hobby Hgbd 1/144 # 06 Seravee Gundam Scheherazade Build Divers, White & nbsp CAT Колесный погрузчик Caterpillar 994K «Elite Series» 1/125 Diecast Model от Diecast & nbsp DP TO DP MULTI MONITOR HUB 2PORT DISPLAYPORT SPLITTER & nbsp Young Hip Japanese Cover Gal Sexy Girl 1/6 Неокрашенная фигура Модель Набор из смолы Rare 1984 Lamb International Plush Vintage Мягкая серая игрушка из Новой Англии 9 дюймов Франклин Минт 1968 Shelby GT500 & nbsp 1 NEW 40.ВСТАВКА ДЛЯ СПЕЦИАЛЬНОГО СВЕРЛА 5 ММ. 453H-40.5 AMEC {J879} & nbsp Металлический фургон Volkswagen с досками для серфинга на багажнике & nbsp WALTER VALENITE WNMG080408-RP5 WPP20S Вставка для токарной обработки, вставка 432, WPP20S Grade PK & nbsp 1/32 Jaguar XJ6 Model Car Alloy Diecast Toy Vehicle Collection Kids Gift Green & nbsp Отделение полиции Западного Аосима Станок & nbsp GWS TOOL GROUP 318970 318970 Концевая фреза 3/4 «2-х зубчатая Monster AVALANCHE 42Deg ZRN Твердосплавная концевая фреза HP L-Reach, 1» LOC & nbsp 1 НОВАЯ ТЕРМОРЕЗИНА С ДИАМЕТРОМ 1/2 «1/2».4 ФЛЕЙТА. ДВОЙНОЙ КОНЕЦ. STUB. СДЕЛАНО США. (M385) & nbsp 5шт. Концевая фреза со сменными пластинами на 90 ° 3/4 «x3,5» и 20 дополнительных пластин Sandvik R390 # 506-SDVK & nbsp 1/43 Porsche 917/20 Pink Pig & nbsp COBRA CARBIDE 19748 Концевая фреза, 4 канавки с альтернативным покрытием, 1 , Угловой радиус: 0,03 дюйма и nbsp HSS Ручной метчик UN UNS 3 3/8 дюйма X 8 т / дюйм, правое основание / заглушка. длинный хвостовик. GOLIATH & nbsp Bandai Armored God Elgayer Original Sd Gundam 0091 4549660143468 4549660143468

Коробка из 100 Leco 810-034-100 8-дюймовых дисков из карбида кремния

Коробка из 100 Leco 810-034-100 8-дюймовых дисков из карбида кремния

Business & Industrial .